Evaluation of avian influenza virus (AIV) diagnostic methods, including a nucleoprotein (NP) competitive enzyme-linked immunosorbent assay (c-ELISA), hemagglutination inhibition (HI) test, type A real-time reverse transcription polymerase chain reaction (RRT-PCR), and embryonating chicken egg (ECE) virus isolation (VI), suggested validity of these tests in wild birds comparable to that reported in poultry. This was determined by analyzing the results from experimental inoculation of three species of wild birds with a low-pathogenicity AIV and from field surveillance data. The NP c-ELISA in a high–AIV prevalence setting had 100% diagnostic sensitivity (Se; 95% confidence interval [CI]: 81.5%–100%) and 91% diagnostic specificity (Sp; 95% CI: 70.8%–98.9%) in negative controls compared with the RRT-PCR. In low–AIV prevalence flocks using a >60% inhibition positivity threshold, relative to the HI test, c-ELISA performed with 90.5% Se (95% CI: 86.2%–93.8%) and 41.2% Sp (95% CI: 38.1%–44.5%). Assessment of HI suggests a titer ≥8 is a positive test result in wild-bird sera, and using this titer had 83.3% Se (95% CI: 58.6%–96.4%) in experimentally infected birds. The RRT-PCR diagnostic performance compared with VI in cloacal swabs varied over 2–6 days postinoculation, having high Se (83.3%–100%) and Sp (94.1%–100%) with substantial agreement (kappa  =  0.8). The cycle thresholds (C_t) for the RRT-PCR of C_t < 37 for positivity and C_t  =  37–40 as indeterminate were found to be valid for the species included in this study. In view of the interpretative diagnostic difficulties in heterogeneous populations of wild birds, this evaluation in three species of wild birds and in surveillance data should provide greater confidence in the application of these methods routinely used in poultry.

Evaluación de los métodos de diagnóstico serológicos y virológicos para influenza aviar en Anseriformes y Charadriiformes silvestres.

La evaluación de los métodos de diagnóstico para la influenza aviar, incluyendo un ensayo por inmunoabsorción competitivo (C -ELISA) para la nucleoproteína (NP), una prueba de inhibición de la hemaglutinación (HI), un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RRT- PCR) para el tipo A y el aislamiento viral en embriones de pollo, sugirió que la validez de estas pruebas en las aves silvestres es comparable a la reportada con las aves comerciales. Esto se determinó mediante el análisis de los resultados de la inoculación experimental de tres especies de aves silvestres con un virus de la influenza aviar de baja patogenicidad y de los datos de vigilancia de campo. La prueba de ELISA para la nucleoproteína mostró una sensibilidad diagnóstica del 100% en un entorno de alta prevalencia de la influenza (Se; 95% intervalo de confianza: 81.5% a 100%) y una especificidad diagnóstica del 91% (Sp; 95% intervalo de confianza: 70.8%–98.9%) en controles negativos en comparación con la RRT- PCR. En parvadas de baja prevalencia de influenza aviar, utilizando un umbral de positividad por inhibición > 60%, relativo a la prueba HI, la prueba de ELISA competitiva mostró una sensibilidad diagnóstica (Se) de 90.5% (95% IC: 86.2%–93.8%) y una especificidad diagnóstica de 41.2% Sp (95% IC: 38.1%–44.5%). La evaluación de la prueba de inhibición de la hemaglutinación sugiere que títulos ≥ 8 sean considerados como positivos en sueros de aves silvestres, y el uso de este título mostró una sensibilidad de 83.3% (95% IC: 58.6%–96.4%) en las aves infectadas experimentalmente. El rendimiento diagnóstico RRT- PCR en comparación con el aislamiento viral con hisopos cloacales mostró variación de 2–6 días después de la inoculación, mostrando una sensibilidad (83.3%–100%) y especificidad (94.1%–100%) elevadas, con una concordancia significativa (kappa  =  0.8). Los ciclos umbrales (C_t) para la prueba de R