Although highly pathogenic avian influenza presents a notable threat to domestic turkeys (Meleagris gallopavo domesticus), there have been minimal infections identified in wild turkeys (Meleagris gallopavo) across the United States. Indeed, recent infections in wild turkeys have either been linked back to or suspected to be the result of spillback from nearby infected domestic turkeys. This study presents avian influenza sampling data for Eastern wild turkeys (Meleagris gallopavo silvestris) across the Maryland portion of the Delmarva Peninsula, in the winter of 2023–2024, with an objective of identifying any circulating influenza A viruses (IAVs), as well as determining the extent of previous exposure to IAVs in this population. We collected swab samples from 36 female wild turkeys. No IAV viral RNA was detected in any sample, based on real-time reverse transcriptase PCR. We collected sera from 31 of the 36 sampled individuals, all of which had biomimetic enzyme-linked immunosorbent assay (bELISA) S/N values >0.7 (range: 0.79–1.29) indicating a lack of antibodies to IAVs. Although our sample size is limited, these results indicate no evidence of current or recent previous IAV infection in sampled birds.

Infección por influenza aviar y anticuerpos no identificados en pavos silvestres del este (Meleagris gallopavo silvestris) muestreados en la península de Delmarva, en los Estados Unidos. Aunque la influenza aviar altamente patógena representa una amenaza notable para los pavos domésticos (Meleagris gallopavo domesticus), se han identificado infecciones mínimas en pavos silvestres (Meleagris gallopavo) en todo Estados Unidos. De hecho, las infecciones recientes en pavos silvestres se han relacionado con o se sospecha que son el resultado de la propagación de pavos domésticos infectados cercanos. Este estudio presenta datos de muestreo de influenza aviar para pavos silvestres del este (Meleagris gallopavo silvestris) en la porción de Maryland de la península de Delmarva, en el invierno de 2023-2024, con el objetivo de identificar cualquier virus de influenza A (IAV) circulante, así como determinar el grado de exposición previa a el virus de influenza A en esta población. Se recolectaron muestras de hisopos de 36 pavos silvestres hembras. No se detectó ARN viral del virus de influenza A en ninguna muestra, según la transcripción inversa y PCR en tiempo real. Se recolectaron sueros de 31 de los 36 individuos muestreados, todos los cuales tenían valores de bELISA S/N >0.7 (rango: 0.79–1.29) que indican una falta de anticuerpos contra el virus de influenza aviar. Aunque nuestro tamaño de muestra es limitado, estos resultados no indican evidencia de infección actual o previa reciente por el virus de influenza A en las aves muestreadas.

Eimeria infections are among the costliest of all diseases affecting commercial chicken production. Critical to the understanding and diagnosis of these infections in a commercial environment is the use of histopathological procedures. These methods allow the diagnostician to determine the severity of infection and recognize situations where intestinal health and bird performance may be compromised. Recent work shows that histopathological assessments improve the accuracy of standard methods of analysis such as lesion scoring and oocyst morphology and provide needed support for PCR analyses. Thus, the use of histopathology in diagnosis of Eimeria infections is of increasing importance. Given this fact and recognizing that a concise review of the endogenous development and histopathology of Eimeria spp. in chickens is lacking, this work provides a review of the salient histopathological features of the seven established Eimeria parasitizing the chicken. It also illustrates the pathological phases of each life cycle that result in performance losses. We include additional comments on our current knowledge of the histopathology of three new Eimeria species detected in chickens.

Estudio Recapitulativo-Desarrollo endógeno y diferencias histopatológicas entre las especies de Eimeria en pollos: Revisión.

Las infecciones por Eimeria se encuentran entre las enfermedades más costosas que afectan la producción comercial de pollos. Para comprender y diagnosticar estas infecciones en un entorno comercial es fundamental el uso de procedimientos histopatológicos. Estos métodos permiten a los profesionales de diagnóstico determinar la gravedad de la infección y reconocer situaciones en las que la salud intestinal y el rendimiento de las aves pueden verse comprometidos. Trabajos recientes muestran que las evaluaciones histopatológicas mejoran la precisión de los métodos estándar de análisis, como la puntuación de las lesiones y la morfología de los ooquistes, y brindan el respaldo necesario para los análisis de PCR. Por lo tanto, el uso de la histopatología en el diagnóstico de las infecciones por Eimeria es cada vez más importante. Dado este hecho y reconociendo que falta una revisión concisa del desarrollo endógeno y la histopatología de Eimeria spp. en pollos, este trabajo proporciona una revisión de las características histopatológicas más destacadas de las siete especies establecidas de Eimeria que parasitan al pollo. También ilustra las fases patológicas de cada ciclo de vida que resultan en pérdidas de rendimiento. Se incluyen comentarios adicionales sobre el conocimiento actual de la histopatología de tres nuevas especies de Eimeria detectadas en pollos.

Avian influenza virus of the H9N2 subtype (AIV H9N2) has become one of the major respiratory pathogens of chickens in Asia, the Middle East, and Africa. AIV H9N2 viruses of the G1 sublineage alone could cause very high economic losses to poultry production and can be associated with secondary Escherichia coli infections and/or synergistic effects with other avian pathogens, such as infectious bronchitis virus, avian metapneumovirus, Mycoplasma gallisepticum, and Mycoplasma synoviae. In addition, the AIV H9N2 subtype is considered a potential pandemic threat to humans. Vaccine applications as a control measure, using commercial inactivated vaccines, have been insufficient to stop virus spread. Phylogeny studies of AIV H9N2 in many countries of Africa showed frequent mutations and/or reassortments in the HA gene. Because of the high variability in the HA gene, vaccines do not often match field strains. This review outlines the epidemiology of AIV H9N2 in Africa, highlighting different routes of viral spread between countries and pointing out the role of live bird markets for maintaining virus circulation and infections. The review traces the chronology of AIV H9N2 detections in African countries and the genetic variations between H9N2 viruses, which might be related to different routes and sources of virus origins. This review might underestimate the number of affected countries, because in many parts of Africa the poultry industry is still in its first stage of development; therefore, the economic impacts of this virus were not obvious, which may be why less attention has been paid to the AIV H9N2 subtype. While carrying out this review, we found that most avian influenza surveillance studies in Africa were mainly focused on highly pathogenic avian influenza H5 and H7. The cocirculation of AIV H9N2 viruses along with HPAIV H5 and H7 in some parts of Africa might increase the risk of emergence of zoonotic avian influenza viruses.

Una revisión actualizada sobre el subtipo H9N2 de influenza aviar de baja patogenicidad en África.

El virus de la influenza aviar del subtipo H9N2 (AIV H9N2) se ha convertido en uno de los principales patógenos respiratorios de pollo en Asia, Medio Oriente y África. Los virus de influenza aviar H9N2 del sublinaje G-1 pueden causar pérdidas económicas muy elevadas a la producción avícola, por sí solos o debido a infecciones secundarias por Escherichia coli y/o por un efecto sinérgico con otros patógenos aviares como el virus de la bronquitis infecciosa, el metapneumovirus aviar, Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae. Además, el subtipo H9N2 se considera una posible amenaza pandémica para los seres humanos. La aplicación de vacunas como medida de control, utilizando diferentes vacunas comerciales inactivadas, ha sido insuficiente para detener la propagación del virus. Los estudios de filogenia de los virus de influenza aviar H9N2 en muchos países de África mostraron mutaciones frecuentes y/o reordenamientos en el gene HA. Debido a la alta variabilidad del gene HA, las vacunas frecuentemente no son similares a las cepas de campo. Esta revisión describe la epidemiología del subtipo del virus de la influenza H9N2 en África, destacando diferentes rutas de propagación viral entre países y señalando el papel de los mercados de aves vivas para mantener la circulación del virus y las infecciones. La revisión rastrea la cronología de las detecciones del virus de influenza aviar H9N2 en países africanos y las variaciones genéticas entre estos virus H9N2, que podrían estar relacionadas con diferentes rutas y fuentes de origen del virus. En esta revisión, se pudo subestimar el número de países afectados, porque en muchas partes de África la industria avícola se encuentra todavía en su primera etapa de desarrollo; por lo tanto, los impactos económicos de este virus no fueron obvios, lo que puede explicar por qué se ha prestado menos atención al subtipo H9N2 del virus de influenza aviar. Al realizar esta revisión, se encontró que la mayoría de los estudios de vigilancia de la influenza aviar en África se enfocaron principalmente en la influenza aviar altamente patógena H5 y H7. La circulación simultánea de los virus de influenza aviar H9N2 junto con los virus de alta patogenicidad H5 y H7 en algunas partes de África podría aumentar el riesgo de aparición de virus zoonóticos de la influenza aviar.

Turkey arthritis reoviruses impose a great threat to commercial turkeys with induction of tenosynovitis/arthritis and hepatitis, which has resulted in substantial economic losses. Emergence of turkey hepatitis reovirus was reported in 2019 and caused mortalities among young poults. We investigated a case of turkey hepatitis reovirus infection in a turkey flock and followed that flock until marketing age to evaluate the influence of infection on flock performance. The infected flock showed tenosynovitis with a negative influence on the flock performance, including reduction in the average daily weight gain and average marketing weight. Reovirus was isolated from the liver of the infected flocks and later, reovirus was isolated from tendons of birds in the same flock. The whole-genome sequencing and sequence analysis of both hepatic and arthritic isolates revealed that they are closely related. We additionally compared this flock performance with other flocks infected with turkey arthritis reovirus, and genomic comparison was established. Our field investigation showed that turkey hepatitis reovirus can induce tenosynovitis and has a greater impact on flock performance when compared with the impact of turkey arthritis reovirus.

Reporte de caso - Impacto de los reovirus de pavo en el rendimiento de las parvadas de pavos comerciales: Un diagnóstico e investigación de campo.

Los reovirus asociados con artritis de pavos imponen una gran amenaza a los pavos comerciales con la inducción de tenosinovitis/artritis y hepatitis, lo que ha resultado en pérdidas económicas sustanciales. La aparición del reovirus de la hepatitis de pavos se informó en 2019 y causó mortalidad entre los pavitos jóvenes. Investigamos un caso de infección por reovirus de la hepatitis de pavos en una parvada de pavipollos y se dio seguimiento a esa parvada hasta la edad de comercialización para evaluar la influencia de la infección en el rendimiento de la parvada. La parvada infectada mostró tenosinovitis con una influencia negativa en el rendimiento de la parvada, incluida reducción en la ganancia diaria de peso promedio y el peso promedio de comercialización. El reovirus se aisló del hígado de las parvadas infectadas y, posteriormente, se aisló de los tendones de las aves de la misma parvada. La secuenciación del genoma completo y el análisis de la secuencia de los aislamientos hepáticos y artríticos revelaron que están estrechamente relacionados. Además, se comparó el rendimiento de esta parvada con otras parvadas infectadas con el reovirus de la artritis del pavo y se estableció una comparación genómica. Nuestra investigación de campo mostró que el reovirus de la hepatitis del pavo puede inducir tenosinovitis y tiene un mayor impacto en el rendimiento de la parvada en comparación con el impacto de reovirus asociados con la artritis del pavo.

Avian hepatitis E (aHEV) is caused by a single-stranded positive-sense RNA virus belonging to the Orthohepevirus B species of the family Hepeviridae. This virus induces enlarged livers and spleens or hepatic rupture with hemorrhages leading to increased mortality that consequently affects egg production. Here we report cases in commercial table egg layer flocks located in five U.S. states that were experiencing an onset of clinical signs between 40 and 52 wk of age. The clinical signs and mortality persist for 8 to 12 wk after the clinical onset. During field necropsies, enlarged and hemorrhagic livers, splenomegaly, and blood-tinged exudate in the coelomic cavity were observed. Seroprevalence studies determined the presence of aHEV antibodies in 30.5% of the screened samples. Electron microscopy detected viral particles in liver samples that resembled aHEV. For identification and quantification of the virus an RT-qPCR SYBR-Green assay was developed, revealing the highest viral load in gallbladders. Molecular studies typed these viruses as genotype 2 and, for the first time in the United States, genotype 3. We also report on Koch postulates fulfillment using blood biochemistry, gross pathology, and histopathology. This report shares important findings on the epidemiology and diagnostics of avian hepatitis E, highlighting the need for continuing aHEV research to strengthen control strategies in the poultry sector.

Detección de hepatitis E aviar en Estados Unidos, desde el diagnóstico hasta los postulados de Koch.

La hepatitis E aviar (aHEV) es causada por un virus de ARN monocatenario de sentido positivo que pertenece a la especie Orthohepevirus B de la familia Hepeviridae. Este virus induce hígado y bazo agrandados o ruptura hepática con hemorragias que conducen a un aumento de la mortalidad que, en consecuencia, afecta la producción de huevos. En este artículo, se informa de casos en parvadas de ponedoras de huevo de mesa comerciales ubicadas en cinco estados de los Estados Unidos, que experimentaron un inicio de signos clínicos entre las 40 y 52 semanas de edad. Los signos clínicos y la mortalidad persistieron durante 8 a 12 semanas después del inicio clínico. Durante las necropsias de campo se observaron hígados agrandados y hemorrágicos, esplenomegalia y exudado teñido de sangre en la cavidad celómica. Los estudios de seroprevalencia determinaron la presencia de anticuerpos contra el virus de la hepatitis E aviar en el 30.5% de las muestras analizadas. La microscopía electrónica detectó partículas virales en muestras de hígado que se parecían al virus de la hepatitis E aviar. Para la identificación y cuantificación del virus se desarrolló un ensayo RT-qPCR con SYBR-Green, que reveló la mayor carga viral en las vesículas biliares. Los estudios moleculares tipificaron estos virus como genotipo 2 y, por primera vez en los Estados Unidos, genotipo 3. También se reporta el cumplimiento de los postulados de Koch mediante bioquímica sanguínea, patología macroscópica e histopatología. Este reporte comparte hallazgos importantes sobre la epidemiología y el diagnóstico de la hepatitis E aviar, destacando la necesidad de continuar la investigación sobre el virus de la hepatitis E aviar para fortalecer las estrategias de control en el sector avícola.

In this systematic review, prebiotic and probiotic dietary additives were compared for their ability to impact growth performance in turkeys. Eligible studies experimentally compared in vivo the effects of administering prebiotics (defined as dietary fiber, dietary carbohydrates, oligosaccharides, or yeast cell wall supplemented in addition to the basal diet) and/or probiotics (single or mixed cultures of living bacteria or fungi) on the average daily gain, and/or feed conversion ratio (FCR), and/or mortality. Database searches were conducted in December 2019 and updated in September 2021 and November 2022. Studies were initially screened for appropriate relevance followed by the target design elements before data were extracted. Risk of bias was performed using the revised Cochrane risk-of-bias tool for randomized trials. The search originally included broiler chickens, returning 3064 studies, and was reduced to 38 studies after limiting the results to turkeys and completing all screening phases. Mean differences were compared by treatment type for each outcome assessed for all included studies. All studies reporting experimental variability appropriately were compared at a treatment group level by outcome for FCR and mortality using mean difference or risk ratio, respectively, with 95% confidence intervals for both outcomes. A meta-analysis was performed on a subset of treatment groups for the outcomes FCR and mortality. Treatment with probiotics from the Bacillus or Lactobacillus genus was used. A meta-analysis was also conducted on prebiotic studies using oligosaccharides. The risk-of-bias assessment showed that 42.5% of studies fell into the “high risk” group, 22.5% of studies fell into “some concerns” group, and 35% fell into the “low risk” group. We found numerically that probiotic and/or prebiotic treatments had, on average, beneficial effects on mean difference for all three outcomes compared to nontreatment controls; however, results varied by individual study. We performed meta-analyses and found no statistically significant effects of Bacillus or oligosaccharide supplementation on either FCR or mortality. Supplementation with Lactobacillus resulted in a lower mortality risk, with no statistically significant effect on FCR. Strong reporting bias was identified when assessing FCR. The relatively small number of published studies, combined with clear reporting biases, indicates a need for more studies in this field with robust study designs.

Estudio Recapitulativo-Eficacia de los prebióticos y probióticos en el rendimiento del crecimiento en pavos: Una revisión sistemática.

En esta revisión sistemática, se compararon los aditivos dietéticos prebióticos y probióticos en cuanto a su capacidad para influir en el rendimiento del crecimiento en pavos. Los estudios elegibles compararon experimentalmente in vivo los efectos de la administración de prebióticos (definidos como fibra dietética, carbohidratos dietéticos, oligosacáridos o pared celular de levadura suplementados además de la dieta basal) y/o probióticos (cultivos simples o mixtos de bacterias u hongos vivos) en la ganancia diaria promedio y/o la tasa de conversión alimenticia (con las siglas en inglés FCR) y/o la mortalidad. Las búsquedas en bases de datos se realizaron en diciembre del 2019 y se actualizaron en septiembre del 2021 y noviembre del 2022. Los estudios se examinaron inicialmente para determinar su relevancia adecuada, seguido de los elementos de diseño objetivo antes de extraer los datos. El riesgo de sesgo se realizó utilizando la herramienta revisada de Cochrane para riesgo de sesgo en ensayos aleatorizados. La búsqueda originalmente incluyó pollos de engorde, y arrojó 3064 estudios, y se redujo a 38 estudios después de limitar los resultados a pavos y completar todas las fases de selección. Se compararon las diferencias medias por tipo de tratamiento para cada resultado evaluado para todos los estudios incluidos. Todos los estudios que informaron la variabilidad experimental de manera apropiada se compararon a nivel de grupo de tratamiento por resultado para la conversión alimenticia y mortalidad utilizando la diferencia de medias o la razón de riesgos, respectivamente, con intervalos de confianza del 95% para ambos resultados. Se realizó un meta-análisis en un subconjunto de grupos de tratamiento para los resultados de conversión alimenticia y mortalidad. Se utilizó el tratamiento con probióticos del género Bacillus o Lactobacillus. También se realizó un meta-análisis en estudios de prebióticos utilizando oligosacáridos. La evaluación del riesgo de sesgo mostró que el 42.5% de los estudios cayeron en el grupo de “alto riesgo”, el 22.5% de los estudios cayeron en el grupo de “algunas preocupaciones” y el 35% cayeron en el grupo de “bajo riesgo”. Se descubrió numéricamente que los tratamientos probióticos y/o prebióticos tuvieron, en promedio, efectos beneficiosos sobre la diferencia de medias para los tres resultados en comparación con los controles sin tratamiento; sin embargo, los resultados variaron según el estudio individual. Se realizó un meta-análisis y no se encontraron efectos estadísticamente significativos de la suplementación con Bacillus u oligosacáridos ni en la conversión alimenticia ni en la mortalidad. La suplementación con Lactobacillus resultó en un menor riesgo de mortalidad, sin un efecto estadísticamente significativo en la conversión alimenticia. Se identificó un fuerte sesgo en los reportes al evaluar la conversión alimenticia. El número relativamente pequeño de estudios publicados, combinado con claros sesgos de reporte, indica la necesidad de más estudios en este campo con diseños de estudio sólidos.

Avian reovirus (ARV) antigenic and genetic variants pose a significant threat to the poultry industry, causing arthritis and tenosynovitis in broiler chickens and resulting in substantial economic losses and welfare issues. Continuous surveillance efforts are important to detect circulating ARV genetic and antigenic variants to update autogenous vaccines needing periodic reformulation to represent field challenge viruses. This study aimed to isolate and genotype ARV genetic variants between 2020 and 2022 from a single broiler chicken company. Clinical and surveillance data from previous years (2017–2019) were also included in this study to analyze the trends of ARV cases from the same company. Out of 40 isolates, between 2020 and 2022, 35 reoviruses were successfully amplified and sequenced. These genetic variants were classified into six of the seven described genotypic clusters, with GC2 (31.43%) and GC5 (25.71%) emerging as the predominant clusters. These results indicate a shift from our previous findings where GC1 and GC6 were the most prevalent. On average, GC1 demonstrated 75% homology compared to the reference strain S1133, and other genotypic clusters exhibited reduced amino acid identity ranging from 54% to 45%. The results of this study suggest a potential impact of autogenous vaccines in reducing ARV cases and reveal a decrease in viral load over the years.

Vigilancia de reovirus aviares en una empresa de pollo de engorde del Valle Central de California

Las variantes antigénicas y genéticas reovirus aviares representan una amenaza importante para la industria avícola, ya que causan artritis y tenosinovitis en pollos de engorde y dan lugar a importantes pérdidas económicas y problemas de bienestar. Los esfuerzos de vigilancia continua son importantes para detectar las variantes genéticas y antigénicas de los reovirus circulantes para actualizar las vacunas autógenas que necesitan reformulación periódica para representar los virus de desafío de campo. Este estudio tuvo como objetivo aislar y genotipar las variantes genéticas de reovirus aviares entre los años 2020 y 2022 de una empresa de pollos de engorde. En este estudio también se incluyeron datos clínicos y de vigilancia de años anteriores (2017-2019) para analizar las tendencias de los casos con reovirus aviares de la misma empresa. De 40 aislamientos, entre los años 2020 y 2022, se amplificaron y secuenciaron con éxito 35 reovirus. Estas variantes genéticas se clasificaron en seis de los siete grupos genotípicos descritos, y GC2 (31.43 %) y GC5 (25.71 %) surgieron como los grupos predominantes. Estos resultados indican un cambio con respecto a nuestros hallazgos anteriores, en los que GC1 y GC6 eran los más prevalentes. En promedio, GC1 demostró una similitud genética del 75 % en comparación con la cepa de referencia S1133, y otros grupos genotípicos exhibieron una identidad de aminoácidos reducida que osciló entre el 54 % y el 45 %. Los resultados de este estudio sugieren un posible impacto de las vacunas autólogas en la reducción de los casos de reovirus aviares y revelan una disminución de la carga viral a lo largo de los años.

Highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N1 viruses belonging to clade 2.3.4.4b have been circulating in wild birds at a transcontinental level, severely threatening several endangered species and causing devastating economic losses for the poultry industry. Vaccination of poultry in combination with other control measures is considered an efficient strategy to prevent disease and reduce the circulation of the virus. Whole-virus inactivated vaccines produced in embryonated chicken eggs are a well-established technology and are known for their high immunogenicity. In this study, we evaluated the protective efficacy of the reverse genetic inactivated H5N8 avian influenza virus vaccine in specific-pathogen-free (SPF) white leghorn chickens (Gallus gallus) and SPF Muscovy ducks (Cairina moschata) against HPAI H5N1 clade 2.3.4.4b viruses isolated in 2021/2022. The tested vaccination regimens included both a single vaccination at 10 days of age and a prime-boost vaccination at 10 and 31 days of age. Vaccinated and age-matched unvaccinated chickens and Muscovy ducks were challenged 3 wk after the last immunization. All vaccinated chickens survived the infection without showing clinical signs. Both vaccination protocols completely suppressed virus shedding in chickens with the exception of one bird receiving a single dose of the vaccine that shed low viral loads via the trachea. The lack of antibodies against the N1 protein in chickens that did not shed virus indicates that vaccination might induce what is generally considered a sterilizing immunity. On the other hand, Muscovy ducks receiving a single dose at 10 days of age recorded good clinical protection, and shedding was reduced. Ducks receiving two vaccinations were fully protected from mortality and morbidity, and the reduction of shedding was statistically significant at 2 to 8 days postchallenge. Moreover, shedding in 3/10 of these ducks was either negligible or absent, and no seroconversion was observed against the N1 antigen. Two vaccinations effectively protected both chickens and ducks against a lethal challenge with an H5N1 virus of the 2.3.4.4b clade and proved compatible with the use of a serological assay to discriminate infected from noninfected vaccinated birds.

Eficacia protectora de una vacuna inactivada del virus de la influenza aviar H5N8 contra los virus de influenza aviar altamente patógenos H5N1 pertenecientes al clado 2.3.4.4b en pollos y patos.

Los virus de influenza aviar altamente patógenos (IAAP) H5N1 pertenecientes al clado 2.3.4.4b han estado circulando en aves silvestres a nivel transcontinental, amenazando gravemente a varias especies en peligro de extinción y causando pérdidas económicas devastadoras para la industria avícola. La vacunación de las aves comerciales en combinación con otras medidas de control se considera una estrategia eficiente para prevenir la enfermedad y reducir la circulación del virus. Las vacunas inactivadas con virus completo producidas en huevos de gallina embrionados son una tecnología bien establecida y son conocidas por su alta inmunogenicidad. En este estudio, se evaluó la eficacia protectora de la vacuna contra el virus de la influenza aviar H5N8 inactivado mediante genética reversa en pollos Leghorn blancos libres de patógenos específicos (SPF) y patos criollos contra virus de influenza aviar de alta patogenicidad H5N1 clado 2.3.4.4b aislados en los años 2021 y 2022. Los regímenes de vacunación estudiados incluyeron una vacunación única a los 10 días de edad y una vacunación de refuerzo a los 10 y 31 días de edad. Los pollos y patos criollos vacunados y no vacunados de la misma edad fueron desafiados tres semanas después de la última inmunización. Todos los pollos vacunados sobrevivieron a la infección sin mostrar signos clínicos. Ambos protocolos de vacunación suprimieron por completo la diseminación del virus en los pollos, con la excepción de un ave que recibió una dosis única de la vacuna que eliminó cargas virales bajas a través de la tráquea. La falta de anticuerpos contra la proteína N1 en pollos que no eliminaron el virus indica que la vacunación podría inducir lo que generalmente se considera una inmunidad esterilizante. Por otra parte, los patos criollos que recibieron una dosis única a los 10 días de edad registraron una buena protección clínica y se redujo la excreción. Los patos que recibieron dos vacunas estuvieron completamente protegidos contra la mortalidad y la morbilidad, y la reducción de la excreción fue estadísticamente significativa entre los 2 y 8 días después de la exposición. Además, la excreción en tres de un total de diez de estos patos fue insignificante o nula, y no se observó seroconversión contra el antígeno N1. Dos vacunaciones protegieron eficazmente tanto a los pollos como a los patos contra una exposición letal con un virus H5N1 del clado 2.3.4.4b y demostraron ser compatibles con el uso de un ensayo serológico para discriminar entre aves vacunadas infectadas y no infectadas.

Ascaridia galli is a nematode commonly found in cage-free chickens. The aim of this study was to test if 0.02% Artemisia absinthium or 1% pumpkin seed powder in feed could be used to alleviate potential negative effects caused by an A. galli infection. At 16 wk, layer-type chickens were divided into 3 groups: untreated control, artemisia, or pumpkin seed. At 25 wk, half the birds in each group were challenged with 250 embryonated A. galli eggs. Treatments did not result in differences in worm egg shedding and worm burden between the groups in week 35. Before the challenge, treatment with artemisia influenced the weight of eggs and some components negatively, and there were interactions of treatment and infection status on egg quality parameters after the challenge. Apparent ileal digestibility of energy, crude protein, calcium, and phosphorus were evaluated in week 35. There were significant interactions of challenge and treatment on digestibility of energy, crude protein, and calcium with challenged birds having a lower energy and crude protein digestibility only in groups fed artemisia. Expression of IL-8, INF-γ, IL-13, TGF-b4, and IL-10 genes in the jejunal wall were investigated by qPCR. IL-8 expression was upregulated in birds fed pumpkin seed compared to control birds and birds treated with artemisia. For IL-13 expression an interaction between treatment and challenge was observed. Only in birds treated with artemisia the relative expression of IL-13 was higher in infected birds compared with naïve birds, while for untreated birds or birds treated with pumpkin seed the infection did not alter the relative expression of any tested gene. TGF-b expression was higher in artemisia-treated and infected birds than in uninfected control birds. Differences between the groups in relative expression of IL-10 and IFN-γ were not significant. Our findings suggest that none of the treatments were effective against A. galli at the used doses.

Efecto de la suplementación con Artemisia absinthium o polvo de semilla de calabaza sobre la carga de gusanos Ascaridia galli, la productividad, la digestibilidad de nutrientes y la expresión de genes de citocinas en gallinas de postura.

Ascaridia galli es un nematodo que se encuentra comúnmente en gallinas no enjauladas. El objetivo de este estudio fue determinar si se podía utilizar un 0.02 % de Artemisia absinthium o un 1 % de polvo de semilla de calabaza en el alimento para mitigar los posibles efectos negativos causados por la infección por A. galli. A las 16 semanas, las gallinas de postura se dividieron en tres grupos: control sin tratamiento, artemisia o semilla de calabaza. A las 25 semanas, la mitad de las aves de cada grupo fueron desafiadas con 250 huevos embrionados de A. galli. Los tratamientos no resultaron en diferencias en la eliminación de huevos de gusanos y en la carga de gusanos entre los grupos en la semana 35. Antes del desafío, el tratamiento con artemisia influyó negativamente en el peso del huevo y en algunos componentes, y hubo interacciones del tratamiento y el estado de la infección en los parámetros de calidad del huevo después del desafío. La digestibilidad aparente ileal de energía, proteína cruda, calcio y fósforo se evaluó en la semana 35. Hubo interacciones significativas del desafío y el tratamiento en la digestibilidad de energía, proteína cruda y calcio, con las aves desafiadas que tuvieron una digestibilidad de energía y proteína cruda más baja solo en los grupos alimentados con artemisia. La expresión de los genes IL-8, INF-γ, IL-13, TGF-b4 e IL-10 en la pared yeyunal se analizaron con qPCR. La expresión de IL-8 se reguló al alta en las aves alimentadas con semilla de calabaza en comparación con las aves de control y las aves tratadas con artemisia. Para la expresión de IL-13, se observó una interacción entre el tratamiento y el desafío. Sólo en las aves tratadas con artemisia la expresión relativa de IL-13 fue mayor en las aves infectadas en comparación con las aves no infectadas, mientras que en las aves no tratadas o tratadas con semillas de calabaza la infección no se alteró la expresión relativa de ningún gene analizado. La expresión de TGF-b fue mayor en las aves tratadas con artemisia e infectadas que en las aves de control no infectadas. Las diferencias entre los grupos en la expresión relativa de IL-10 e IFN-γ no fueron significativas. Nuestros hallazgos sugieren que ninguno de los tratamientos fue eficaz contra A. galli en las dosis utilizadas.

Hypocalcemia is one of the top causes of death in commercial egg-laying chickens and represents a major welfare and economic concern for the egg industry. A large amount of calcium is lost daily in the eggshell and is replenished by intestinal absorption and medullary bone resorption. Despite an adequate diet, calcium reserves can become depleted over time, resulting in hypocalcemia. Postmortem diagnosis is a diagnosis of exclusion based on the presence of an active ovary, an egg in the shell gland, and no other lesions to account for the death of the hen. The goal of the present study was to develop a quantitative postmortem test to confirm the diagnosis of hypocalcemia in laying hens. Forty, 35-wk-old, white leghorn hens were randomly assigned to one of three groups that were fed 6.3%, 4.0%, or 1.5% calcium diets for 10 wk. Hens fed the 1.5% calcium diet relative to 4.0% or 6.3% had a statistically significant lower ionized calcium, a decrease in average daily egg production, thinner eggshells, thinner mid-diaphyseal tibial cortical bone, an increase in the amount of unmineralized osteoid in the tibial diaphysis, and enlarged parathyroid glands. Mineral analysis combined with receiver operating characteristic curve analysis found that values below 5.71 M for Ca, 3.49 M for P, and 0.84 M for Mg in tibia were consistent with hypocalcemia.

Perfil diagnóstico post mortem de gallinas de postura con hipocalcemia.

La hipocalcemia es una de las principales causas de muerte en gallinas de postura comerciales y representa una preocupación importante en términos de bienestar y economía para la industria productora de huevo. Una gran cantidad de calcio se pierde diariamente en el cascarón del huevo y se repone mediante la absorción intestinal y la reabsorción del hueso medular. A pesar de una dieta adecuada, las reservas de calcio pueden agotarse con el tiempo, lo que resulta en hipocalcemia. El diagnóstico post mortem es un diagnóstico de exclusión basado en la presencia de un ovario activo, un huevo en la glándula del cascarón y ninguna otra lesión que explique la muerte de la gallina. El objetivo del presente estudio fue desarrollar una prueba post mortem cuantitativa para confirmar el diagnóstico de hipocalcemia en gallinas de postura. Cuarenta gallinas Leghorn blancas de 35 semanas de edad fueron asignadas aleatoriamente a uno de tres grupos que fueron alimentados con dietas con 6.3%, 4.0% o 1.5% de calcio durante 10 semanas. Las gallinas alimentadas con la dieta de 1.5% de calcio en comparación con las dietas con 4.0% o 6.3% mostraron niveles de calcio ionizado estadísticamente significativamente menores, una disminución en la producción diaria promedio de huevos, cascarón de huevo más delgadas, hueso cortical tibial diafisario medio más delgado, un aumento en la cantidad de osteoide no mineralizado en la diáfisis tibial y glándulas paratiroides agrandadas. El análisis mineral combinado con el análisis de la curva característica operativa del receptor encontró que los valores por debajo de 5.71 M para Ca, 3.49 M para P y 0.84 M para Mg en la tibia eran consistentes con hipocalcemia.

Necrotic enteritis (NE), caused by Clostridium perfringens (CP), is an economically important disease in the broiler chicken industry. The incidence of NE is common in 3–6-wk-old broiler chickens. Developing an effective vaccination strategy against NE, preferably delivering a single dose of vaccine at hatch without a booster vaccine, to protect broiler chickens against NE is a challenge. Hence, the objectives of this study were to 1) induce mucosal immunity in broiler chickens against NE by oral delivery of a wild-type live CP vaccine, adjuvanted with cholera toxin (CT), at hatch with or without prior in ovo administration of cytosine-phosphorothioate-guanine oligodeoxynucleotides (CpG-ODN) as an immunomodulator; 2) protect broiler chickens against NE by immunizing their broiler breeder parents by oral delivery of a wild-type live CP-CT vaccine. Animal experiments were conducted to determine the efficacy of single oral delivery of the CP-CT vaccine against NE challenge using homologous or heterologous CP isolates. Mucosal immune response was evaluated by measuring intestinal immunoglobulin A (IgA) antibody levels by ELISA. Protection of broilers after CP challenge was evaluated by assessing mortality and gross and histopathologic lesions of NE in the intestine. Single oral vaccination of broilers at hatch with a CP-CT vaccine with or without prior in ovo delivery of CpG-ODN (cytosine-phosphorothioate-guanine oligodeoxynucleotides) and without a booster vaccine provided significant protection against NE (p < 0.0001). Protection of broilers was correlated with reduced mortality rates, fewer jejunal pathologic changes, and significantly higher levels of immunoglobulin Y (IgY) and intestinal IgA antibodies. A significant influx of CD8⁺ T cells was observed in the peripheral blood and jejunum at 2 days post–CP-CT vaccine, which indicated the absence of CP-CT vaccine–mediated immune tolerance. Furthermore, broiler chicken progenies were protected against NE by vaccinating broiler breeder parents by oral delivery of the CP-CT vaccine followed by a CP-CpG-ODN booster vaccine. Overall, this study demonstrated the utility of CT as a potent mucosal adjuvant with a live CP vaccine against NE challenge in broilers and broiler breeders.

Inmunoprotección de pollos de engorde contra la enteritis necrótica mediante la administración oral en el momento de la eclosión de una vacuna viva de Clostridium perfringens con toxina de cólera como adyuvante.

La enteritis necrótica (NE), causada por Clostridium perfringens (CP), es una enfermedad económicamente importante en la industria de pollos de engorde. La incidencia de la enteritis necrótica es común en pollos de engorde de tres a seis semanas de edad. El desarrollo de una estrategia de vacunación eficaz contra la enteritis necrótica, preferiblemente administrando una dosis única de vacuna en el momento de la eclosión sin una vacuna de refuerzo, para proteger a los pollos de engorde contra la dicha enfermedad es un desafío. Por lo tanto, los objetivos de este estudio fueron 1) inducir inmunidad de mucosas en pollos de engorde contra la enteritis necrótica mediante la administración oral de una vacuna viva de C. perfringens de tipo silvestre, con toxina del cólera (CT) como adyuvante, en el momento de la eclosión con o sin administración previa in ovo de oligodesoxinucleótidos de citosina-fosforotioato-guanina (CpG-ODN) como inmunomodulador; 2) proteger a los pollos de engorde contra la enteritis necrótica inmunizando a sus progenitores reproductores mediante la administración oral de una vacuna viva C. perfringens de tipo salvaje con toxina de cólera (CP-CT). Se realizaron experimentos con animales para determinar la eficacia de la administración oral única de la vacuna CP-CT contra el desafío de enteritis necrótica utilizando aislamientos de C. perfringens homólogos o heterólogos. La respuesta inmune de las mucosas se evaluó midiendo los niveles de anticuerpos de inmunoglobulina A (IgA) intestinales mediante ELISA. La protección de los pollos de engorde después del desafío de C. perfringens se evaluó evaluando la mortalidad y las lesiones macroscópicas e histopatológicas de enteritis necrótica en el intestino. La vacunación oral única de pollos de engorde al nacer con una vacuna CP-CT con o sin administración in ovo previa de CpG-ODN (oligodesoxinucleótidos de citosina-fosforotioato-guanina) y sin una vacuna de refuerzo proporcionó una protección significativa contra la enteritis necrótica (p < 0.0001). La protección de los pollos de engorde se correlacionó con tasas de mortalidad reducidas, menos cambios patológicos yeyunales y niveles significativamente más altos de inmunoglobulina Y (IgY) y anticuerpos IgA intestinales. Se observó una afluencia significativa de células T CD8⁺ en la sangre periférica y el yeyuno a los dos días posteriores a la administración de la vacuna CP-CT, lo que indicó la ausencia de tolerancia inmunitaria mediada por la vacuna CP-CT. Además, las progenies de pollos de engorde se protegieron contra la enteritis necrótica al vacunar a los progenitores de reproductoras de engorde mediante la administración oral de la vacuna CP-CT seguida de una vacuna de refuerzo CP-CpG-ODN. En general, este estudio demostró la utilidad de la toxina de cólera como un potente adyuvante mucoso con una vacuna de C. perfringens viva contra el desafío de la enteritis necrótica en pollos de engorde y reproductoras de engorde.

Focal duodenal necrosis (FDN) is an intestinal disease in layer chickens that causes egg production drops and decreased egg weight. The etiology of FDN is undetermined but has been linked to Clostridium perfringens (CP) and Clostridium colinum (CC) in previous studies. Recently, we discovered Escherichia coli (EC), Gallibacterium anatis (GA), and Enterococcus spp. could also be potential contributors to the pathogenesis of FDN. Our challenge model aimed to reproduce FDN lesions in layers using different bacterial mixtures with a customized corn-soy diet as a predisposing factor. In Experiment 1, 30 laying hens (Hy-line W-36) at 35 wk of age were divided into four treatment groups and one control group, and all birds were supplied a customized feed. A daily oral challenge with the bacterial mixture lasted for 2 wk and was stopped at week 3. In Experiment 2, 66 laying hens (Hy-line W-36) at 26 wk of age were used, and the experiment focused on three challenge groups with mixtures composed of CP, CC, and EC. Additionally, two control groups were included, in which birds were fed either the customized or commercial layer feed. The daily oral challenge in Experiment 2 lasted for 3 wk. Red foci/patches, mucosal hyperemia, and erosion were detected in challenged birds. Histologic analysis of lesions found mild to moderate lymphoplasmacytic inflammation and crypt necrosis. Overall, although this study did not successfully reproduce FDN-specific histopathologic lesions, certain bacterial mixtures stood out when comparing gross changes and lesion scores. The CP + CC and CP + CC + EC groups showed significantly higher lesion scores compared to the control group. This study highlighted the role of some key bacterial participants in the development of lesions and damage to the duodenum of challenged birds. For future successful reproduction of FDN, additional factors may need to be considered for a successful model.

Replicación de la necrosis duodenal focal en gallinas de postura mediante una mezcla bacteriana en experimentos de desafío.

La necrosis duodenal focal (con las siglas en inglés FDN) es una enfermedad intestinal en gallinas de postura que causa una disminución en la producción y en el peso del huevo. La etiología de la necrosis duodenal focal es indeterminada, pero se ha relacionado con Clostridium perfringens (CP) y Clostridium colinum (CC) en estudios previos. Recientemente, se descubrió que Escherichia coli (EC), Gallibacterium anatis y Enterococcus spp. también podrían contribuir a la patogénesis de la necrosis duodenal focal. Nuestro modelo de desafío tuvo como objetivo reproducir las lesiones de necrosis duodenal focal en gallinas de postura utilizando diferentes mezclas bacterianas con una dieta especialmente formulada de maíz y soya como factor predisponente. En el Experimento 1, 30 gallinas ponedoras (Hy-line W-36) de 35 semanas de edad se asignaron en cuatro grupos experimentales y un grupo control, y a todas las aves se les suministró la dieta especialmente diseñada. Se utilizó un desafío oral diario con la mezcla bacteriana durante dos semanas y se detuvo en la semana 3. En el Experimento 2, se utilizaron 66 gallinas ponedoras (Hy-line W-36) de 26 semanas de edad, y el experimento se centró en tres grupos de desafío con mezclas compuestas de C. perfringens, C. colinum and E. coli. Además, se incluyeron dos grupos control, en los que las aves fueron alimentadas con el alimento diseñado o con alimento comercial para ponedoras. El desafío oral diario en el Experimento 2 duró tres semanas. Se detectaron focos/manchas rojas, hiperemia mucosa y erosión en las aves desafiadas. El análisis histológico de las lesiones encontró inflamación linfoplasmocítica de leve a moderada y necrosis de las criptas. En general, aunque este estudio no logró reproducir con éxito las lesiones histopatológicas específicas de la necrosis duodenal focal, ciertas mezclas bacterianas destacaron al comparar los cambios macroscópicos y las puntuaciones de las lesiones. Los grupos con C. perfringens + C. colinum y C. perfringens + C. colinum + E. coli mostraron puntuaciones de lesiones significativamente más altas en comparación con el grupo control. Este estudio destacó el papel de algunas bacterias clave en el desarrollo de lesiones y daño al duodeno de las aves afectadas. Para una reproducción exitosa de la necrosis duodenal focal en el futuro, es posible que sea necesario considerar factores adicionales para un modelo exitoso.

A flock of Northern bobwhites (Colinus virginianus) reared for release as game birds and commercial meat production were experiencing clinical coccidiosis. Fecal samples were collected and recovered oocysts had average measurements of 22.9 (19.7–25.3) µm by 18.8 (16.7–20.9) µm; the morphometrics and morphology of the oocysts were consistent with those of Eimeria lettyae Ruff 1985, which possess a nonrefractive polar granule and asymmetrical sporocysts. Experimental infections using oocysts propagated from the field sample were used to determine the complete development of the coccidium and to analyze oocyst production. Birds inoculated with 100, 400, 1000, and 4000 oocysts began shedding the parasites 4 days postinoculation; shedding persisted for 3–7 days. Oocyst shedding peaked on Day 5 for birds inoculated with the two lower doses administered (i.e., 100 and 400 oocysts) and peaked a day later for birds provided with the two higher doses (i.e., 1000 and 4000 oocysts). Although total oocyst output (233,132,050 oocysts/bird) was greatest in the Northern bobwhites that received 4000 oocysts, the fecundity of E. lettyae was nearly three times higher in birds infected with 1000 oocysts (fecundity = 173,324) than birds gavaged with 4000 oocysts (fecundity = 58,283). To examine the endogenous development of the parasite histologically, Northern bobwhites were inoculated with various doses of the Eimeria sp. every 3 or 6 hr throughout the estimated prepatent period determined during the analysis of parasite shedding. Four generations of merogony and gametogony were observed in the duodenum and jejunum, and the prepatent period was estimated to be 90–96 hr. Similarities to previous descriptions of E. lettyae support the identification of this parasite in the infected flock of Northern bobwhites. Sequences of the complete mitochondrial genome (GenBank PQ178945) and two variants of the partial nuclear 18S ribosomal DNA (GenBank PQ186547 and PQ186548) were generated using polymerase chain reactions and Sanger sequencing to aid in future diagnoses of E. lettyae.

Diagnóstico y caracterización de Eimeria lettyae (Apicomplexa: Eimeriidae) de codornices de Virginia (Colinus virginianus) criadas comercialmente en Ontario, Canadá.

Una parvada de codornices de Virginia (Colinus virginianus) criadas para su liberación como aves de caza y producción comer-cial de carne presentaba coccidiosis clínica. Se recolectaron muestras fecales y los ooquistes recuperados tenían medidas promedio de 22.9 (19.7–25.3) µm por 18.8 (16.7–20.9) µm; la morfometría y la morfología de los ooquistes eran consistentes con las de Eimeria lettyae Ruff 1985, que posee un gránulo polar no refractivo y esporocistos asimétricos. Se utilizaron infecciones experimentales con ooquistes propagados a partir de la muestra de campo para determinar el desarrollo completo del coccidio y analizar la producción de ooquistes. Las aves inoculadas con 100, 400, 1000 y 4000 ooquistes comenzaron a eliminar los parásitos cuatro días después de la inoculación; la eliminación persistió durante tres a siete días. La eliminación de ooquistes alcanzó su punto máximo al día 5 en las aves inoculadas con las dos dosis más bajas administradas (es decir, 100 y 400 ooquistes) y alcanzó su punto máximo un día después en las aves inoculadas con las dos dosis más altas (es decir, 1000 y 4000 ooquistes). Aunque la producción total de ooquistes (233,132,050 ooquistes/ave) fue mayor en las codornices de Virginia que recibieron 4000 ooquistes, la fecundidad de E. lettyae fue casi tres veces mayor en las aves infectadas con 1000 ooquistes (fecundidad = 173,324) que en las aves alimentadas por sonda con 4000 ooquistes (fecundidad = 58,283). Para examinar el desarrollo endógeno del parásito histológicamente, se inocularon codornices de Virginia con varias dosis de Eimeria sp. cada tres o seis horas durante el período prepatente estimado que fue determinado durante el análisis de la eliminación del parásito. Se observaron cuatro generaciones de merogonia y gametogonia en el duodeno y el yeyuno, y se estimó que el período prepatente fue de 90 a 96 horas. Las similitudes con descripciones anteriores de E. lettyae respaldan la identificación de este parásito en la parvada infectada de codornices de Virginia. Se generaron secuencias del genoma mitocondrial completo (GenBank PQ178945) y dos variantes del ADN ribosómico nuclear 18S parcial (GenBank PQ186547 y PQ186548) mediante reacciones en cadena de la polimerasa y secuenciación de Sanger para ayudar en futuros diagnósticos de E. lettyae.